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適用于血漿樣本的微量文庫構建試劑盒推薦

更新時間:2020-11-10瀏覽:1626次

高品質的游離DNA (cell free DNA) NGS文庫構建
ThruPLEX® Plasma-Seq Ki
· 專為cfDNA設計:經過優(yōu)化的修復及連接試劑
· 高品質NGS文庫:高的文庫多樣性,在寬廣的GC含量范圍內,可以達到高檢測再現(xiàn)性
· 起始量范圍廣:<1 ng到30 ng cfDNA量
· 快速簡便:1個反應管、2小時、3步反應的簡單操作,無需純化或樣品轉移步驟
· 應用領域:液態(tài)活檢、ctDNA、目標區(qū)域測序等領域文庫構建
· 兼容自動化平臺:Beckman FXP Workstation
 
■ 產品說明:

ThruPLEX Plasma-seq Kit基于ThruPLEX技術,并用于血漿來源cfDNA高品質NGS文庫構建。該試劑已針對cfDNA進行了專門優(yōu)化,在保持樣本GC代表性的基礎上,盡可能的提升了文庫的復雜度。文庫可用于CNV分析、全基因組測序分析或是采用一些panel針對目標區(qū)域進行捕獲富集后的DNA分析,如Agilent SureSelect and Roche NimbleGen SeqCap EZ。
ThruPLEX Plasma-Seq Kit不包含index。兼容的 Index如下所述,需要單獨購買。
使用 ThruPLEX Plasma-Seq試劑盒制備的文庫,提供了更高的靈敏度,可以更好地了解血漿樣本中基因變異結果。與其它液態(tài)活檢的樣品一樣,血漿由于其易獲得、價值高的特點,在某些研究領域,如對腫瘤學的轉化研究或者對孕婦血漿中胎兒游離DNA的發(fā)育學研究,深受科研工作者的重視。

 

 

 
圖1. ThruPLEX® 技術概要。ThruPLEX Plasma-seq Kit技術3步反應即可完成針對cell free DNA的建庫工作。1~30 ng含量的cf DNA首先高效的進行末端修復。通過采用莖環(huán)形接頭(無單鏈尾巴)進行高效平端連接,降低了背景。封閉的5’端阻止了接頭-接頭二聚體形成。隨后未使用的接頭被降解,進一步降低背景。高保真度擴增的方式完成以上反應,并獲得含有illumina index的文庫。
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.)
 
圖2. 高cfDNA文庫多樣性、更少的Unmapped Reads。ThruPLEX Plasma-seq Kit構建的文庫,具有高的多樣性和低的duplicates和unmapped reads。圖中表示cfDNA分別提取于3份血漿樣品,文庫定量采用Qubit熒光定量。Bioanalyzer測定mononucleosomal DNA在各樣品的量分別為0.09 ng、0.62 ng、15.44 ng。Pooled libraries采用illumina NextSeq 500 paired end模式測序,且每個文庫產生17 M到25 M reads。每個文庫在down-sampling數(shù)據(jù)至17 M reads以后,計算Duplication rates。
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.)
 
圖3. 優(yōu)異的靶向測序文庫構建能力。圖中所示ThruPLEX Plasma-seq Kit構建的文庫通過panel進行高效捕獲,對kinome進行深度測序分析以檢測突變。3個血漿樣品分別起始建庫量為5 ng、6.5 ng、10 ng,三次重復。目標區(qū)域采用SureSelectXT2的ClearSeq Human DNA Kinome Panel進行捕獲,并用Illumina Miseq平臺進行測序,平均每個文庫獲得5 M reads,目標堿基被成功捕獲分析。
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.)
 
圖4. 高重復性的、無偏倚的GC覆蓋度。針對人類基因組,ThruPLEX Plasma-seq Kit表現(xiàn)出高再現(xiàn)性、低偏倚GC覆蓋度NGS文庫構建能力。9次獨立的血漿樣品文庫構建的實驗結果表明,ThruPLEX重復性高于其它產品。文庫的制備是利用的1 mL血漿來源cfDNA,后續(xù)采用illumina NextSeq 500進行測序。作為對比,A公司試劑構建了4份獨立血漿樣品的文庫。 
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.)
 
圖5. Karolinska協(xié)會和CRUK測試的結果。5 ng游離cf DNA采用ThruPLEX Plasma seq Kit進行illumina文庫構建。結果表明利用Hiseq平臺進行的Low-pass WGS,每個文庫能獲得接近12.5 M reads。 
(*以上數(shù)據(jù)來源于Karolinska 協(xié)會,瑞典)
 
■ 產品組成
· Template Preparation Buffer(Red)
· Template Preparation Enzyme(Red)
· Library Synthesis Buffer(Yellow)
· Library Synthesis Enzyme(Yellow)
· Library Amplification Buffer(Green)
· Library Amplification Enzyme(Green)
· Nuclease-Free Water(Clear)
· Indexing Reagents(Blue)
· Quick Protocol(N/A)
 
■ 保存
-20℃
 
DNA HT dual index kits
DNA HT dual index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用,用以構建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含Illumina Nextera® XT v2 index序列對應的index引物,多可提供384種不同的雙端index,用于樣本混合測序時的區(qū)分。其中index引物預先分裝在4個不同條形碼標記的index微孔板中,每個微孔板可提供不同的96種index組合(Code No.R400660-R400663),index微孔板(96N Sets A-D)的每個孔提供的量足夠進行一次測序反應;另一種是一套中有24個單獨的反應管,每個反應管中包含不同的雙端index組合(Code No.R400664),且每個反應管(24N)提供的量足夠進行兩次測序反應。
 
DNA unique dual index kits
DNA unique dual index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用,用以構建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含“IDT for Illumina UD”對應的index引物,多可提供96種不同雙端index,用于樣本混合測序時的區(qū)分。index引物預先分裝在不同的4組各24個單獨的管中,其中每組可提供24種不同index引物組合(Code No.R400665-R400668)。每個index引物管(24U Sets A-D)提供的量足夠進行兩次測序反應。
 
DNA single index kits

DNA single index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用,用以構建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含與“TruSeq LT set A”序列對應的index引物,可提供24種單端index,用于樣本混合測序時的區(qū)分。index引物預先分裝在不同的2組各12個單獨的管中,其中每組可提供12種不同index引物組合(Code No.R400695和R400697)。每個index引物管(12U Sets A-B)提供的量足夠進行8次測序反應。

 

 

 
圖1. ThruPLEX® 技術概要。ThruPLEX Plasma-seq Kit技術3步反應即可完成針對cell free DNA的建庫工作。1~30 ng含量的cf DNA首先高效的進行末端修復。通過采用莖環(huán)形接頭(無單鏈尾巴)進行高效平端連接,降低了背景。封閉的5’端阻止了接頭-接頭二聚體形成。隨后未使用的接頭被降解,進一步降低背景。高保真度擴增的方式完成以上反應,并獲得含有illumina index的文庫。
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.)
 
圖2. 高cfDNA文庫多樣性、更少的Unmapped Reads。ThruPLEX Plasma-seq Kit構建的文庫,具有高的多樣性和低的duplicates和unmapped reads。圖中表示cfDNA分別提取于3份血漿樣品,文庫定量采用Qubit熒光定量。Bioanalyzer測定mononucleosomal DNA在各樣品的量分別為0.09 ng、0.62 ng、15.44 ng。Pooled libraries采用illumina NextSeq 500 paired end模式測序,且每個文庫產生17 M到25 M reads。每個文庫在down-sampling數(shù)據(jù)至17 M reads以后,計算Duplication rates。
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.)
 
圖3. 優(yōu)異的靶向測序文庫構建能力。圖中所示ThruPLEX Plasma-seq Kit構建的文庫通過panel進行高效捕獲,對kinome進行深度測序分析以檢測突變。3個血漿樣品分別起始建庫量為5 ng、6.5 ng、10 ng,三次重復。目標區(qū)域采用SureSelectXT2的ClearSeq Human DNA Kinome Panel進行捕獲,并用Illumina Miseq平臺進行測序,平均每個文庫獲得5 M reads,目標堿基被成功捕獲分析。
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.)
 
圖4. 高重復性的、無偏倚的GC覆蓋度。針對人類基因組,ThruPLEX Plasma-seq Kit表現(xiàn)出高再現(xiàn)性、低偏倚GC覆蓋度NGS文庫構建能力。9次獨立的血漿樣品文庫構建的實驗結果表明,ThruPLEX重復性高于其它產品。文庫的制備是利用的1 mL血漿來源cfDNA,后續(xù)采用illumina NextSeq 500進行測序。作為對比,A公司試劑構建了4份獨立血漿樣品的文庫。 
(*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.)
 
圖5. Karolinska協(xié)會和CRUK測試的結果。5 ng游離cf DNA采用ThruPLEX Plasma seq Kit進行illumina文庫構建。結果表明利用Hiseq平臺進行的Low-pass WGS,每個文庫能獲得接近12.5 M reads。 
(*以上數(shù)據(jù)來源于Karolinska 協(xié)會,瑞典)
 
■ 產品組成
· Template Preparation Buffer(Red)
· Template Preparation Enzyme(Red)
· Library Synthesis Buffer(Yellow)
· Library Synthesis Enzyme(Yellow)
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