Peprotech  300-02重組人-干擾素IFN-γ

Peprotech  300-02重組人IFN-γ

產(chǎn)品規(guī)格：100μG

產(chǎn)品描述：

Peprotech 重組人-干擾素IFN-γ是由CD4和CD8T淋巴細(xì)胞以及活化的NK細(xì)胞產(chǎn)生的酸不穩(wěn)定干擾素。IFN-γ受體存在于大多數(shù)免疫細(xì)胞中，其通過增加I類MHC蛋白的表面表達(dá)來響應(yīng)IFN-γ信號傳導(dǎo)。這促進(jìn)了抗原呈遞給T輔助細(xì)胞（CD4 +）?？乖蔬f細(xì)胞中的IFN-γ信號傳導(dǎo)和識別抗原的B和T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的抗原特異性階段。另外，IFN-γ刺激許多淋巴細(xì)胞功能，包括巨噬細(xì)胞，NK細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的抗微生物和抗腫瘤反應(yīng)。人IFN-γ是物種特異性的，僅在人和靈長類動物細(xì)胞中具有生物活性。重組人IFN-γ是含有144個氨基酸殘基的16.8kDa蛋白質(zhì)。

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PeproTech細(xì)胞因子中不含載體蛋白（Carrier Protein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以少量的鹽來進(jìn)行凍干處理，因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi)，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后，務(wù)必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象）。

產(chǎn)品來源：大腸桿菌

CIK 培養(yǎng)用細(xì)胞因子和抗體：

IFN-γ (干擾素-γ)

IFN-γ 具有上調(diào)外周血淋巴細(xì)胞表面IL-2R表達(dá)的作用，因此會增強(qiáng)T細(xì)胞對IL-2促

增殖反應(yīng)的敏感度和強(qiáng)度。在誘導(dǎo)CIK細(xì)胞形成的過程中加入IFN- γ ，可降低IL-2的用量。

研究發(fā)現(xiàn)，IFN-γ加入的順序與CIK的細(xì)胞毒活性密切相關(guān)。先加入IFN- γ，培養(yǎng)24后再

加入IL-2，可明顯提高CIK的細(xì)胞毒活性。

CIK 是“Cytokine-Induced Killer Cells"的縮寫，中文全稱為“細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞"。

CIK 是單個核細(xì)胞在CD3 單抗和多種細(xì)胞因子(包括IFN-γ, IL-2 等)的作用下培養(yǎng)獲得的一

群以CD3+CD56+細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞的異質(zhì)細(xì)胞群， 其既具有T 淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活

性，又具有NK 細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞)的非MHC(主要組織相容性抗原)限制性腫瘤殺傷能力。

CIK 細(xì)胞具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣，對正常組織毒性低，體外可高度擴(kuò)增等特點，是目前

臨床上廣泛使用的過繼性免疫-治療細(xì)胞。

Peprotech  300-02重組人-干擾素IFN-γ

AA序列：MQDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKA IHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFQGR RASQ

純度：通過SDS-PAGE凝膠和HPLC分析≥98％。

生物活性：該ED?50通過使用HT-29細(xì)胞細(xì)胞毒性分析來確定是≤0.05納克/毫升，相當(dāng)于≥2×10的比活性7單位/ mg。

交叉反應(yīng)性：

細(xì)菌，魚+病毒，人類，人類+細(xì)菌，人類+倉鼠，人類+小鼠，人類+病毒，Mandarin魚，猴子，小鼠，N / A，豬，兔子，大鼠

可用于研究艾滋病，免疫系統(tǒng) 干細(xì)胞和分化

【細(xì)胞制備】

1． 外周血單個核細(xì)胞的采集

1.1 用血細(xì)胞分離機(jī)采集患者自身的外周血單個核細(xì)胞50-100mL；

1.2 淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法進(jìn)一步純化單個核細(xì)胞(PBMC)；

1.3 無血清培養(yǎng)液洗滌2 次，獲得純度在90%以上的PBMC。

2． CIK 細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定

2.1 將PBMC 按1-2 x 106/ml 的濃度懸浮于無血清培養(yǎng)液中，加入1,000 U/ml 的重組

人IFN-γ，37oC，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2.2 24h 后加入50ng/ml 的CD3 單克隆抗體和300 U/ml 的重組人IL-2，刺激CIK 細(xì)

胞的生長和增殖；

注：此時也可同時加入100 U/ml 的重組人IL-1α。

2.3 每3 天半量換液或擴(kuò)瓶一次，并補(bǔ)加重組人IL-2 300 U/ml；

2.4 在培養(yǎng)的第14d，收獲CIK 細(xì)胞。

2.5 CIK 細(xì)胞質(zhì)控：

2.9.1 臺盼藍(lán)染色檢測：活細(xì)胞應(yīng)在80%以上；

2.9.2 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面CD3、CD8、CD56 等分子的表達(dá)：CD3+CD56+細(xì)

胞的比例應(yīng)在20%以上。

2.9.3 細(xì)胞殺傷實驗：以CIK 細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞，以腫瘤細(xì)胞(可為原代腫瘤細(xì)胞或

腫瘤細(xì)胞株)為靶細(xì)胞，將效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞按10 : 1(數(shù)目比) 的比例加入

96 孔U 型板中，每孔含靶細(xì)胞1 x 104 個，終體積為200 μl，設(shè)3 個復(fù)孔。

培養(yǎng)4h，然后取培養(yǎng)上清，用乳酸脫氫酶(LDH) 試劑盒檢測效應(yīng)細(xì)胞對靶

細(xì)胞的殺傷率。

2.9.4 收獲細(xì)胞前，取少量培養(yǎng)物進(jìn)行細(xì)菌、真菌培養(yǎng)，并檢測支原體、衣原體，

及內(nèi)毒素(標(biāo)準(zhǔn)：病原學(xué)檢測陰性，內(nèi)毒素<5 Eu)。

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